谈艾滋病检测中应注意的问题

摘要：早期艾滋病病毒（HIV）感染仅仅会表现出轻微症状或者无症状，只有通过实验室检测才可以准确发现HIV感染者/艾滋病（AIDS）患者。但是在实验室检测的过程中很容易由于各种问题影响实验室检测结果的准确性，为了有效避免漏检、误检现象，本文主要分析了目前较为常见的几种实验室检测方法中应该注意的问题，以期提高艾滋病检测的有效性、准确性。

关键词：艾滋病；实验室检测；注意问题

艾滋病（AIDS）主要是由于人类免疫缺陷病毒（HIV）导致的免疫缺陷性疾病，目前临床上还没有研究出有效预防艾滋病的疫苗，也没有研究出有效的治疗方法。实验室检测是诊断HIV感染者/AIDS患者的主要手段，其中血清HIV抗体检测是诊断各时期艾滋病的重要方法，假如处于HIV感染“窗口期”或者HIV抗体结果无法确定的情况下，还需要通过抗原检测、HIV特异性抗体检测、核酸检测、病毒分离培养等多种方式辅助诊断，才可以确定属于HIV感染[1]。其次，临床很多学者已经经过实践研究证明[2]，核酸检测、CD+4 T细胞检测对于患者用药疗效观察。

1 HIV抗体检测中需要注意的几点问题

1.1试剂盒 HIV抗体检测中，选用的试剂盒必须得到国家药品监督管理局的注册或者批准，而且需要经过中国药品生物制品检定所的严格审批、检查合格，经过国家艾滋病预防及控制中心进行实验室评估后的质量为优良等级。同时，应该仔细检查试剂盒的有效使用期限，必须要求使用的产品在有效期内，应该仔细检查试剂盒的批号，如果试剂盒批号不同的情况下，有的试剂是不允许混合使用的。

1.2做好实验前的相关准备工作 稀释液以及酶标板等只有在室温的条件下才可以开始实验，因此在正式开始实验前应该将其从冰箱中提前取出来。其次，因为有的时候酶标板上的盖膜会存在一些缝隙，这些缝隙会改变酶标小球的颜色以及体积，一旦发现酶标小球出现变化后一定要及时更新。

1.3加样环节 实验室采用酶联免疫吸附试验（E LISA）试剂盒大部分都会选择全自动或者半自动酶标仪，酶标仪的质量对于实验室检测结果有很大的影响。全自动酶标仪主要是仪器自动进行加样。酶标仪在日常使用过程中，一定要做好清洗工作，保证加样针能够保持畅通，而且应该准确把握加样量。其次，检测者应该及时检查、核对样本管编号和仪器上的编号位置是否相符，还应该注意仪器有没有将样品添加到酶标板中的正确位置，总之，检测者应该密切注意观察整个仪器加样过程。假如是手工加样的情况下，首先应该确保准确的吸样量，同时还应该确保酶标板上样品添加到正确的位置上。这样可有效预防由于加样失误而出现假阳性或者假阴性等情况。

1.4温育条件 加样后应该选择水浴法进行温育，避免温度不均匀。放置酶标板之前，应该提前将温度调节到实验需要的温度，确保能够拥有充足的温育时间。其次，需要注意的是，不能反复应用封板用的膜。

1.5洗板 在实验的过程中，一定要严格根据说明书中的要求确定洗板的洗液量、浸泡时间、洗板次数。同时，应该定时清理洗板机的吸液孔，避免标本纤维蛋白丝以及被洗液结晶将吸液孔堵塞，保证所有的洗液空以及吸液孔能够在洗板的过程中保持正常、高效的运行状态。如果洗板没有清理干净的情况下，很容易出现假阳性结果。

1.6质量控制环节 每一次进行试验的过程中，都应该将内外部对照质控血清包含进来，这样可大大提高HIV检测结果的可靠性、准确性。对于内部质控血清，一定要特别注意批号，如果试剂盒的批号不同的情况下，禁止混合使用。其次，每次试验都必须添加外部质控血清，结束试验后，一定要检查当天的质控结果有没有控制在合理允许的范围中。

临床上有的怀孕妇女、恶性疾病患者、器官移植化患者、输血患者以及自身免疫性疾病患者，因为其他非病毒蛋白抗体之间产生的交叉反应，极易导致患者的身体出现一些抗体，这种反应非常类似于HIV p24核心蛋白抗体引发的一系列反应，患者初筛、复检的吸光度值都相对比较低。一旦发生这样的情况，一定要和接诊医生及时联系，详细询问患者的病情后，再决定需不需要送往实验室进行确证试验。大部分确证试验虽然结果表明都是阴性，但是检测者也不能习惯性的将初筛阴性报告发出去，避免出现漏检情况。

2 核酸检测

临床上已经广泛推广应用了第四代HIV抗体试剂，大大提前了HIV临床感染窗口期，然而早期HIV感染患者并没有明显的临床症状，这种情况下需要辅助进行核酸检测。很多学者提出[3]，HIV感染后患者血浆中病毒载量和患者的病情发展速度呈正相关性，也就是说血浆中病毒载量越多，患者的病情发展越快。在实验过程中还存在很多因素会对核酸检测结果的可靠性、准确性造成很大的影响。因此，需要注意以下几点：①相对于其他采血管RNA水平而言，EDTA抗凝采血管采集到的血浆会有一定偏高，而且随着时间的不断变化，并不会有很大的损失，因此在标本采集的过程中，采血管应该采用EDTA抗凝采血管。②采全血后4～6 h将血浆分离的效果最好，采集血样标本后，应该将血浆尽快分离，并且冰冻保存。③根据相关数据研究显示，血浆样本的HIV RNA含量保存在-20℃的环境下12 w，其含量会低于保存在-80℃环境。到了20～24 w，HIV RNA含量会降低30%～80%。因此将血浆分离后，应该立即进行检测，不然应该将其保存于-80℃环境中。

3 CD4+T淋巴细胞检测

现阶段，CD4+T淋巴细胞亚群检测方法较为常用的是流式细胞术，因为CD4+T淋巴细胞的水平值波动幅度比较大。为了有效确保临床检测结果的可靠性、准确性，应该注意以下几点：①采集标本的过程中，应该尽量采用EDTA抗凝采血管，在采血的过程中也应该及时将血液标本摇匀，避免出现凝块。②最好在室温2 h内及时检测标本，假如无法及时进行检测的情况下，在室温下将标本保存的时间应该在2 d以内。加入抗体的过程中，千万不能将加样枪头触碰到管底部微球，避免吸头会吸附微球，降低管内微球数量，增加CD+4 T淋巴细胞计数。③加样量的准确性会对CD4+T淋巴细胞计数结果有直接的影响，因此必须定期校正加样枪，采用反向加样法进行加样。④一定要保证流式细胞仪的工作状态保持最佳状态。当天使用完仪器后，应该立即清洗，为了确保管路保持更好的状态，可以先用次氯酸钠进行清洗后，再采用具备去蛋白作用的清洗液再进行一次清洗，而且应该定期进行一次大冲洗。

综上所述，想要有效确保艾滋病检测结果的质量，要求实验室应该具备较高的硬件水平，并且制定严格的管理制度以及科学的操作规程。而实验室检测人员也应该具备较高的专业素质以及技术水平，提高艾滋病诊断正确性，为临床诊治艾滋病提供科学、可靠的依据。

参考文献：

[1]潘品良，影响血样样本中HIV-1病毒载量检测值的因素分析[J].中国艾滋病性病，2006，12（5）：476-478.

[2]肖瑶，张桂云，裴丽健，等.存放温度及时间对于HIV/AIDS患者外周血CD4、CD8细胞测定结果的影响[J].中华实验和临床病毒学杂志，2004，18（2）：129-131.

[3]姜兆金.艾滋病筛查实验室保证检测质量应注意的问题[J].中国民族民间医药，2008，06（02）：52-54.